选购elisa试剂盒需要考虑的因素

ELISA试剂盒有着准确性高、灵敏度高、特异性强的许多长处，在试验室的应用现已适当普及，绝大多数是用于检测不知道样本中抗原的浓度。现在市面上的ELISA试剂盒既有国产也有进口，数量繁复令人目不暇接，并且质量也是良莠不齐，那么咱们怎样才能选出zui适用的产品呢？首先要依据咱们所要检测的分子进行检测，除此以外也还有一些需求加以考量的要素，下面就为咱们供给几点参考。

1. 试验类型

ELISA试剂盒有多种类型，不过它们都有一个一起特色，就是进行抗原捕获。一般捕获形式包括将抗原吸附到微孔板或许用微孔板上的抗体进行捕获。In-cell ELISA和酶联免疫斑点ELISPOT是两种特别的类型，In-cell ELISA需求将微孔板中培育的细胞进行固定和通透化，然后再用抗体原位检测。ELISPOT有点像蛋白印迹Western blot，先在带膜的微孔板中培育细胞，然后在膜上检测细胞分泌的抗原构成斑点。此外，咱们还需求依据本身需求挑选96孔板或是384孔板进行ELISA试验。

一般人们运用双抗夹心法进行ELISA试验，双抗夹心法中抗原被夹在捕获抗体和检测抗体之间，这种办法既灵敏又有用，受到了许多研究者的青睐。不过有时候双抗夹心法并不是*挑选，例如有时候抗原特别小让两个大抗体难以附着，又或许抗体只要一个抗体结合位点。在上述情况下，竞赛性ELISA就更为适用，这种办法是选用带符号的纯化抗原与样本中无符号的抗原进行竞赛，以结合捕获抗体。

2. 抗体类型

单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于ELISA，实际上有时候二者结合作用更好。例如，关于双抗夹心法而言，用多抗进行捕获而单抗进行检测有时更有协助。多抗能够保证捕获一切抗原，随后单抗再特异性检测具有特定抗原表位的抗原。

双抗夹心法ELISA中捕获抗体与检测抗体（不论多抗还是单抗）的配对很有考究。咱们不期望捕获抗体与检测抗体竞赛抗原上的同一位点，为此咱们就需求保证捕获抗体和检测抗体所识别的抗原表位不存在堆叠。假如捕获抗体和检测抗体之间发生了冲突，就会对试验成果发生较大影响。要防止这一问题，咱们能够挑选购买“matched pair"的捕获/检测抗体对，这些打包在一起的抗体是商家经过验证才引荐的好组合。

3. 穿插反响

假如抗体间发生冲突或穿插反响就会影响整个试验的特异性。其间抗体来历所带来的兼容性就是穿插反响的一个要素。虽然现在购买源自指定动物的抗体越来越容易，咱们仍有必要承认一下是否会发生穿插反响的问题。在用双抗夹心法进行ELISA检测时，检测用的二抗有必要特异性针对检测一抗，而不能与捕获抗体起反响。假如检测用二抗与捕获抗体结合，试验特异性就会大打折扣。一般咱们选用源自不同宿主的捕获抗体和检测一抗，来防止上述问题。

与此同时，了解试剂盒中供给的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），避免这些buffer含有可能影响抗原抗体相互作用的组分，使检测成果收到影响。

4. 检测方法

现在检测ELISA有许多途径，咱们能够依据自己的偏好进行挑选。一般ELISA检测的是酶促反响的可溶性产品，抗体上结合有相应的酶（例如一般运用的辣根过氧化物酶HRP），而反响系统中增加有相应的底物（如3，3-二氨基联苯胺DAB）。这种酶促反响生成具有特征性的色彩，能够经过分光光度计进行检测，碱性磷酸酶AP也是一种常用酶。酶能够结合在一抗上，ELISA试剂盒也能够结合在二抗上，还能够运用链霉亲和素符号的酶与亲和素符号的一抗结合。此外ELISA的成果检测还包括放射性检测、荧光检测、化学发光或显色法检测等。