引起昆虫ELISA试剂盒测试结果错误的原因

昆虫ELISA试剂盒办法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响要素较多，并且其操作中有必定的技能要求，在检测过程中除正常反响外，有经常见到一些错误的成果。引起昆虫ELISA试剂盒测定错误成果的原因主要有：①标本要素;②试剂要素;③操作要素。下面就一些常见ELISA操作过程中的问题逐个剖析。

1.样品稀释

酶联免疫反响是一种灵敏性很高的反响，假如血清不稀释，不行避免会发生很强的非特异性反响，呈现假阳性。

2.试剂盒平衡

试剂盒中一切试剂和板条均应在实验前平衡至室温（约25℃），一般需在室温放置20——30分钟以上。平衡时刻太短会形成试剂混匀不行，样品孵育时刻相对缩短，ELISA反响不行充沛。冬季室温低，可将试剂盒置37℃温箱20分钟。

3.昆虫ELISA试剂盒样品和试剂的混匀

稀释前、后的样品必须充沛混匀，一切试剂在加样前也须摇匀，以确保实验的均一性。

4.加样

在现在的ELISA试剂盒中，必定有运用微量加样器参加样本的步骤。留意的要害点是：加样不行太快，要避免加在孔壁上部，不行溅起和发生气泡。加样太快，无法确保微量加样的准确性和均一性

5.温育

温育是ELISA测定中影响测定胜败zui为要害的一个要素。

6.洗板

固相免疫测定技能是一种非均相免疫测定技能，需以洗刷操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反响温育过程中吸附的非特异成份别离开来，以确保ELISA测定的特异性。

7.昆虫ELISA试剂盒边缘效应

运用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应”，即外周孔显色较中心孔深。经研讨证真实温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温（一般在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。

8.显色

显色必定要操控时刻，依据试剂盒阐明操作即可。一般来说，显色时刻过短，成果偏低;显色时刻过长，空白增高或许非特异性显色添加。

9.比色

比色要留意波长的挑选。以TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有运用，而前者比色波长为450nm，后者为492nm，滤光片需依据要求随时替换。因而，容易呈现滤光片错用的问题。

其次，单波长或双波长比色挑选的问题。所谓的单波长比色便是一般的以对显色具有吸收的波长如450nm或492nm进行比色测定;而双波长双色则酶标仪在灵敏波长如450nm和非灵敏波长如630nm下各测定一次，灵敏波上下的吸光度测定值为样本测定酶反响特异显色的吸光度与板孔上指纹、刮痕、尘埃等脏物所致的吸光度之和;非灵敏波长下测定即改动波长至必定值，使得样本测定酶反响特异显色的吸光度值为零，此刻测得的吸光度即为脏物的吸光度值。